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진단혈액검사

일반혈액검사(CBC)

혈액 3mL을 채취하여 즉시 8~10회 부드럽게 EDTA 혈액을 전도혼합해야 합니다.
항응고제(EDTA)와 혈액량의 비율이 적합하지 않거나, 혼합이 불충분할 경우 clot 및 dilution(과다 항응고제에 의한 혈구수와 hematocrit의 수치 및 cell morphology와염색에 영향)이 생겨 결과의 오차가 발생할 수 있습니다.

혈액도말표본검사

말초혈액을 도말하여 각 혈구의 수, 형태 이상여부를 검사하여 빈혈, 백혈병 등의 여러 혈액질환을 진단합니다.

2장의 깨끗한 Slide glass를 준비합니다.
하나의 Slide glass를 왼손의 엄지와 중지 사이에 들고 우측 상단에서 1.5cm 정도 떨어진 곳에 혈액 한방울을 올려놓습니다.
Spreader glass(미는 Slide glass)를 오른손의 엄지와 중지 사이에 잡습니다.
Slide glass에 올려놓은 혈액 방울이 Spreader glass 뒷면에 닿게 하여 혈액이 균일하게 퍼지게 합니다.
Spreader slide와 Slide glass 사이의 각을 약 30~40도로 유지하며 Slide glass를 지탱하고 있는 왼손 엄지를 향하여 Spreader slide를 일정 속도로 밀어줍니다. 미는 속도가 느리면 도말이 얇게 되고 빠르면 두껍게 됩니다. 너무 얇게 도말 되면 백혈구는 도말 끝부분으로 이동하는 경향이 있으므로 주의해야 합니다.
도말한 Slide는 공기 중에 건조시키고 오염되지 않도록 주의합니다.

혈액응고검사 : CITRATE 혈액

Citrate는 칼슘을 제거하여 항응고 작용을 나타내므로 응고인자들이 들어있기 때문에 PT(prothrombin time) 및 aPTT(activated partial thromboplastin time) 등 혈액응고검사(coagulation test)에 쓰입니다.

혈액응고 검사는 sodium citrate tube에 채혈 된 혈액을 사용하며, 19~21 게이지 바늘 (소아는 23게이지 나비바늘)을 사용하여 venipuncture에 의하여 또는 indwelling catheter로부터 검체를 채취합니다. 만약 Vacutainer가 사용된다면 두번째 용기를 coagulation 검체로 이용하여야 합니다.
항응고제는 3.2% sodium citrate를 사용하며 검체와 항응고제의 비율은 9:1 (10.9-1.9mMol/L)이고, 채혈량은 sodium citrate tube에 표시되어 있습니다. 채혈량을 정확히 지켜주십시오. 비율이 정확하지 않을 경우 검사결과가 달라질 수 있습니다.
채혈한 후 즉시 3~4회 혼합해주어야 합니다. 신속히 잘 혼합하지 않으면 혈액의 일부분에서 응고가 발생하여 미세한 응고덩어리(microclot)가 생기고 그만큼 응고인자가 감소되어 검사결과에 오류를 초래할 수 있습니다.
채취된 검체는 4시간 안에 검사가 이루어져야 하며 그렇지 못할 경우 냉장(2~6℃), 2,500g에서 15분간 원심 분리 후 platelet-poor plasma를 분리하여 냉동 보관합니다.

혈액응고 검사용 검체 채취: INDWELLING CATHETER를 통한 채혈

Indwelling catheter를 통해 채혈할 때에는 heparin에 의한 오염을 고려하여 생리식염수 5mL로 씻어(flushing) 낸 후 처음 혈액 5mL(혹은 line volume의 6배)는 버리고, 그 이후의 혈액을 응고 검사용으로 이용합니다. Normal saline lock(capped off venous port)에서는 dead volume의 2배만큼 버려야 합니다. 만약 예상치 못한 혈액응고 검사 결과가 나오면 새로이 채혈하여 검사 하거나 resin을 이용하여 heparin을 제거 후 다시 검사합니다.

항응고제(anticoagulant)에 따른 검사 종류

항응고제	작용기전	Monitor 검사
와파린(Coumadin)	비타민K 관련 인자 억제: Factor II, VII, IX, X 반감기 40시간	PT
헤파린(Unfractionated heparin UFH)	Factor X 의 차단 출혈 합병 시 황산프로타민 투여	aPTT, ACT, TT, Anti-factor Xa
저분자량헤파린 (Low Molecular Weight Heparin LMWH)	Dalteparin, enxaparin 등 신장으로 배설되므로 신부전시에는 주의해야함 반감기가 길어서 하루에 1~2회 피하주사로 투여 황산프로타민에 의해 부분적으로 억제된다. 헤파린보다 Xa 길항 효과가 더 뛰어나다. 출혈성 부작용이 더 적다. 용량-반응 관계가 예측 가능	Anti-factor Xa, aPTT 검사 불필요
아스피린(Aspirin)	혈소판 기능을 불활성화 시킴 수술 전 일주일동안 복용 중단 Desmopressin (DDAVP)가 출혈 시간을 정상화 시킬 수 있음	Platelet drug response assay

선천성대사이상검사

채취시기

선천성대사이상검사는 생후 48~72시간에 하는 것이 가장 적합합니다.
위중한 환아의 경우 즉시 채취하여 검사하고, 2주 후 재채혈하여 재검합니다.
수혈을 해야 하는 경우 수혈받기 전 검체가 필요합니다. 불가능한 경우 생후24~48시간에 채취하여 최종 수혈 후 14일째의 검체를 재채취합니다.

채혈방법

란셋으로 신생아 발꿈치의 외측부를 찔러 혈액을 흐르게 합니다.
처음 나온 혈액 한 방울은 거즈로 닦아내고 혈액이 커다란 방울이 되게 한 후 채혈지에 있는 4개의 원 안에 떨어뜨려 뒷면까지 충분히 흡수 되도록 채취합니다.
발뒤꿈치를 너무 심하게 눌러서 혈액을 채취하면 조직액으로 인해 비정상적인 검사소견을 보일 수가 있으므로 주의합니다.
채취 시 손에 묻은 요오드, 알코올, 패트로늄 젤리, 대변, 소변, 핸드로션은 검사의 결과에 영향을 미칠 수 있으니 주의합니다.

혈액여지 취급법

채혈 후 평평한 냉암소에서 3~4시간 완전히 건조시킵니다.
신생아의 출생일자, 성별, 채혈일자, 수유상태 등 특이사항을 반드시 기재합니다.

열이나 습기, 직사광선에 직접 노출되지 않도록 합니다.
채취된 여지가 겹쳐져서 혈액이 다른 곳에 접촉되지 않도록 주의합니다.
채취된 여지에 우유나 아스팔탐이 들어있는 음료수가 오염되는 경우 심각한 대사질환으로 오판될 수 있으므로 주의합니다.

올바른 채혈

Indwelling catheter를 통해 채혈할 때에는 heparin에 의한 오염을 고려하여 생리식염수 5mL로 씻어(flushing) 낸 후 처음 혈액 5mL(혹은 line volume의 6배)는 버리고, 그 이후의 혈액을 응고 검사용으로 이용합니다. Normal saline lock(capped off venous port)에서는 dead volume의 2배만큼 버려야 합니다. 만약 예상치 못한 혈액응고 검사 결과가 나오면 새로이 채혈하여 검사 하거나 resin을 이용하여 heparin을 제거 후 다시 검사합니다.

검체 예	채혈 시 주의 사항
	천자 후 혈액의 큰 방울이 형성되면 채혈지의 앞면에 묻혀 뒷면까지 충분히 스며들도록 해주세요. 같은 방법으로 4개의 원을 완전히 채워주세요.

부적합 채혈

검체 예	채혈 시 주의 사항
혈액량이 부족한 경우	천자 후 혈액의 큰 방울이 형성되면 채혈지의 앞면에 묻혀 뒷면까지 충분히 스며들도록 해주세요. 같은 방법으로 4개의 원을 완전히 채워주세요.
긁히거나 마모된 경우	Capillary tube 혹은 기타 기구를 이용해서 채혈지에 혈액을 흡수시키지 않도록 유의해 주세요.
충분히 건조되지 않은 경우	음지에서 최소한 4시간 이상 건조시켜주세요. 건조되기 전에 채혈지를 겹쳐 놓지 마세요. 반감기가 길어서 하루에 1~2회 피하주사로 투여 황산프로타민에 의해 부분적으로 억제된다. 헤파린보다 Xa 길항 효과가 더 뛰어나다. 출혈성 부작용이 더 적다. 용량-반응 관계가 예측 가능
희석, 변색, 오염된 경우	혈액 채취 부위를 과도하게 압박하지 말아주세요. 장갑을 끼고 채혈하세요. 맨손, 또는 알콜, 용액, 살균제, 핸드로션, 파우더 등을 바르고 채혈할 경우 채혈지원 부위가 오염될 수 있습니다. 채혈지에 직사광선이나 열을 피해주세요.
혈청고리를 보일 경우	동일한 원에 혈액을 반복해서 묻히지 말아주세요. 채혈한 용지가 용액 등 이물질로 오염되지 않도록 주의해주세요.
응고 혹은 층이진 경우	채혈지의 동일한 원에 혈액을 반복해서 묻히지 말아주세요. 채혈지 양면에 혈액을 묻히지 말아주세요. 채혈기구를 이용하여 채혈지에 묻히지 말아주세요.
과도하게 스며든 경우	기구를 사용해서 과도한 양의 혈액을 채혈지에 묻히지 않도록 주의해 주세요. 채혈지 양면에 혈액을 묻히지 말아주세요.